用高通量筛选法（MACS/FACS）筛选新的医学靶基因的研究

 项目简介：
本研究成功建立了一整套快速、敏感、适合工业化操作的筛选基因受体的新方法，即磁力细胞分选（Magnetic Cell Sorting, MACS)和流式细胞仪分选（Flow Cytometry Sorting, FACS)相结合的方法。已经建立了携带cDNA的逆转录病毒载体高效转染装配细胞的方法，即二次转染的方式，其转染效率可高达81%。建立了操作简单，周期短，高通量的筛选功能基因的MACS/FACS法；从mRNA的分离到筛选出表达受体的细胞，整个筛选周期仅为3周。应用MACS/FACS系统在相应的cDNA文库中筛选到了2个基因的受体，应用配体诱饵B7-1从人T淋巴细胞cDNA文库中筛选其功能受体CD28；应用配体诱饵B7-H2，从活化的人T淋巴细胞cDNA文库中筛选到其受体ICOS。最终，从纯化的受体表达细胞中分离出受体的cDNA编码序列。这些结果表明，所建立的表达克隆系统适合于大规模分离受体和膜结合配体，以及在后基因组时代用于研究新蛋白的功能。应用生物信息学手段收集了人resistin基因序列，克隆、表达了人resistin基因，纯化了人resistin蛋白。运用所建立的高通量MACS/FACS筛选系统初步筛选并鉴定了人resistin表达细胞和人resistin受体表达细胞。本项目的成功为应用这一方法大量筛选那些尚未知功能的潜在基因，对筛选到的基因进行深入研究，寻找能够直接发展为药物的新基因，或作为药物作用的靶基因。对于发现具有我国自主知识产权的功能基因，并将其转化为有重大社会效益和经济效益的产品具有重要意义。